-
جزوه ی کامل
سلام من جزوه ی کاملی در این زمینه دارم اگر دوست داشتین اطلاع بدین تا به دستتون برسونم
۱۳۹۰ يکشنبه ۱۶ بهمن
| 1
| vesali
1
1
0
-
سلام
برای تعیین کیفیت باید روی ژل آگارز 1% نمونه هاتون ران کنید، از اسپکتروفوتومتر هم برای کمیت و کیفیت دی ان آ استفاده میشه
برای پی سی ار هم نیاز به
dNTP, Mgcl2, pcr Bufer, آنزیم Taq و پرایمر داریم
dNTP نوکلئوتیدها رو برای تکثیر فراهم میکنه و آنزیم Taq DNA Polimerse از روی پرایمر قطعه مورد نظر رو تکثیر میکنه
Mgcl2,PCR Buferهم برای فعالیت آنزیم لازمه
۱۳۹۱ شنبه ۲۲ مهر
| 1
| masomehhassani
1
1
0
-
سلام
كمّيّت سنجي و غلظت سنجي DNA استخراج شده
معمول‌ترين روش جهت تعيين غلظت DNA، استفاده از اسپكتروفتومتر است. بازهاي نيتروژني موجود در نوكلئوتيدهاي يك رشته‌ي اسيد نوكلئيك، نور فرابنفش (UV) را در طول موج 260 نانومتر مي‌باشند. با استفاده از مسير نوري يك سانتي‌متري، ضريب جذب DNA در طول موج 260 نانومتر 20 جذب مي‌كنند. بنابراين با استفاده از سل كوارتز يك سانتي متري، 50 ميكروگرم بر ميلي ليتر DNA دو زنجيره‌اي در طول موج 260 نانومتر جذبي برابر يك خواهد داشت. وجود اسيد آمينه‌ي تريپتوفان در پروتئين باعث جذب در 280 نانومتر مي‌شود. نسبت جذب 260 به 280، خلوص DNA را نشان مي‌دهد. اين نسبت بايد بين 1/8 تا 2 باشد. اگر نسبت كوچك‌تر از 1/8 باشد، آلودگي DNA را با پروتئين يا فنل نشان مي‌دهد و نسبت بزرگ‌تر از 2 به دليل وجود RNA در نمونه مي باشد.از تقسيم جذب نوري (OD) در طول موج 260 نانومتر به جذب نوري در طول موج 280 نانومتر، ميزان خلوص نمونه‌ي DNA، بدست آمد همچنين جهت تعيين ميزانِ غلظت DNA از فرمول زير استفاده شد.
ضریب رقّت * 50 *OD 260 = غلظت DNA بر حسب نانوگرم بر میکرولیتر
كيفيّت سنجي DNA استخراج شده
الكتروفورز دستگاهي است كه بر اساس نيروي عبور جريان الكترون‌ها كار مي‌كند. به اين صورت كه با ايجاد يك ميدان الكتريكي باعث حركت اجسام داراي بار منفي به طرف قطب مثبت و اجسام داراي بار مثبت به طرف قطب منفي مي‌شود. DNA به دليل وجود يون‌هاي فسفات و همچنين به دليل اتصال مولكول‌هاي SDS به آن‌ها (مولكول‌هاي SDS بار منفي دارند)، داراي بار منفي زياد مي‌باشند و به همين دليل به طرف قطب مثبت حركت مي‌كنند. سرعت قطعات سبك‌تر از قطعات سنگين‌تر بيشتر است و به همين دليل قطعات مختلف DNA از هم جدا مي‌شوند و نوارهاي مختلفي را تشكيل مي‌دهند.
جهت تعيين كيفيّت DNA استخراج شده، الكتروفورز نمونه‌هاي DNA روي ژل آگارز 0/8 درصد و با استفاده از دستگاه الكتروفورز افقي به مدّت يك ساعت با ولتاژ 80 ولت، انجام شد.
(برگرفته از پایان نامه خودم)
۱۳۹۱ جمعه ۲۶ آبان
| 0
| amin.basiri
0
0
0