محیط نیم مک فارلند

۱۳۹۳ دوشنبه ۱ ارديبهشت 14:27 | pharmed

نظرات : 3

روش تهیه محیط کشت نیم مک فارلند (McFarland) محیطی که در اصل یک تست آنتی بیوگرام است که میزان کدر بودن نمونه خود را با ان مقایسه می کنیم . این محیط حاوی ۱.۵*۱۰۸ باکتری است. این محیط به مدت ۶ ماه در تاریکی و در ظرف در بسته که به وسیله اتش بسته شده است می تواند مورد استفاده قرار گیرد . اما با این اوصاف ، اگر در هر زمان رسوبی در لوله مشاهده شد ، محیط غیر قابل استفاده خواهد بود . زمانی که می خواهیم از این محیط استفاده کنیم باید انرا به خوبی حل بزنیم و جهت مقایسه کدورت لوله کشت با لوله مک فارلند، استفاده از یک زمینه سفید با خطوط سیاه و نور کافی توصیه می‌شود این اقدام بویژه جهت باکتریهایی مثل هموفیلوس، گنوکک و پنوموکک که در محیط آبگوشت به خوبی رشد نمی‌کنند توصیه می‌شود. روش کار:  روش های مختلفی برای تعیین حساسیت باکتری ها به انتی بیوتیک ها وجود دارد اما من در این قسمت تست روتین و ساده دیسک دیفیوژن (Disk diffusion ) را معرفی می کنم. بعد از ایزوله کردن باکتری ، مقداری از کلونی باکتری را به وسیله انس (نه لوپ) برداشته و در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم. باید در نظر داشت که چون، در تست آنتی بیوگرام میزان کدر بودن برای ما خیلی مهم است، بنابر این در انتخاب مقدار نمونه باید دقت کنیم تا نمونه را بیشتر یا کمتر از نیم مک فارلند برنداریم. اگر میزان کدورت کمتر از نیم مکفارلند باشد، مقداری دیگر از نمونه را در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم و یا اگر میزان کدر بودن، بیشتر از نیم مک فارلند باشد در این صورت باید مقداری سرم فیزیولوژی استریل اضافه کرد تا به کدورت مناسب و برابر با نیم مک فارلند برسیم. بعد از تهیه محلول هموژن خود، با سواب استریل محلول را به هم زده و بعد از آبکشی کردن سواب، (برای آب کشی، سواب را با قدرت به دیواره لوله تکیه داده و فشار دهید تا آب آن گرفته شود.) آن را به محیط کشت مولر هینتون انتقال می دهیم و به طور کامل به وسیله سواب، محیط کشت را به صورت چمنی کشت می دهیم به طوری که هیچ محلی در محیط از قلم نیافتد. بعد از کشت، دیسک های انتی بیوگرام که قبل از نیم ساعت از تست، بیرون یخچال قرار داده شده اند را انتخاب و بر روی محیط کشت انتقال می دهیم. باید ذکر کنم که نحوه قرار دادن دیسکها در محیط کشت مولر هینتون، به صورت دایره ای  است و فاصله این دیسک ها از هم دیگر حدود 12 میلیمتر باشد و باید از دیواره هم فاصله داشته باشند. در ضمن فاصله این دیسک ها را می توان با توجه به تجربه خود کم و یا زیاد کنیم. دیسک های مورد استفاده هم باید با نوع باکتری ایزوله شده ما مناسب باشد مثلاً هیچ وقت برای باکتری گرم منفی، پنی سیلین قرار نمی دهیم چون نسبت به آن مقاوم هستند و یا اینکه آنتی بیوتیک کلروامفینیکل را برای کشت ادرار قرار نمی دهیم چون این انتی بیوتیک نمی تواند وارد مجاری ادراری شود و ... بعد از قرار دادن دیسک ها، در پلیت را بسته و به مدت 24 ساعت آنها را در دمای 37 درجه سانتیگراد، انکوبه می کنیم (لازم به ذکر است که بنا به تحقیقات تازه محقین، دمای انکوبه برای آنتی بیوگرام به ۳۵ درجه کاهش یافته است و مدت زمان آن هم به ۱۶ تا ۱۸ ساعت کاهش یافته است). بعد از 24 ساعت پلیت را زیر چراغ بررسی می کنیم. آنگاه می‌باید قطر هاله عدم رشد را با خط‌ کش اندازه گیری کرد و با توجه به جدول همراه دیسک ها، گزارش تست انتی بیوگرام خود را برای هر یک از انتی بیوتیک ها، به صورت حساس (Susceptible)، مقاوم (Resistant) و یا نیمه حساس (Intermediate) گزارش می شود.

22 0

نظرات

  • جهت استاندارد کردن غلظت تلقيح براي تست تعيين حساسيت ميكروبي، بايد از استاندارد سولفات باريم (BaSo۴)، برابر با استاندارد نيم مک فارلند استفاده شود.

    ۱۴۰۱ يکشنبه ۲۴ مهر | 10:39 | DONYA66

  • استاندارد نيم مک فارلند: 1- هدف: جهت استاندارد کردن غلظت تلقيح براي آزمايش تعيين حساسيت ميكروبي، بايد از استاندارد سولفات باريوم (BaSo4)، برابر با استاندارد نيم مک فارلند استفاده شود. 2- مواد و ابزار لازم: کلرور باريوم دهيدراته، اسيد سولفوريک، مزور، بالن ژوژه، لوله آزمايش در پيچ دار استريل. 3- روش تهیه استاندارد نیم مک فارلند: استاندارد نيم مک فارلند سولفات باريوم به روش زير تهيه مي شود: 1) ml 5/0 از کلرور باريوم (BaCl2) mol/l 048/0 (2H2O .W/VBaCl2 175/1%) را به ml5/ 99 اسيد سولفوريکmol/l 18/0 (V/V 1%) اضافه کنيد و با هم زدن مداوم سوسپانسيون بدست آوريد. 2) چگالي صحيح کدورت استاندارد با استفاده از اندازه گيري جذب در اسپکتروفتومتر با طول مسیر نوري cm1، مشخص شود. جذب در nm 625 بايد بين 08/0 تا 13/0 باشد. 3) سوسپانسيون سولفات باريوم بايد به مقدار ml 6-4 در لوله هاي در پيچ دار هم اندازه با لوله هاي سوسپانسيون باکتريايي ريخته شود. 4) درب اين لوله ها بايد محکم بسته شوند و در دماي اتاق و در تاريکي نگهداري شوند. 5) استاندارد سولفات باريوم قبل از هر بار استفاده بايد به شدت (ترجيحا با و

    ۱۴۰۱ دوشنبه ۲۱ شهريور | 15:29 | Phasco-qc

  • روش تهیه محلول استاندارد 0.5 مک فارلند: محیط نیم مک فارلند محیطی در تست آنتی بیوگرام است که میزان کدر بودن نمونه خود را با ان مقایسه می کنیم. این محیط حاوی ۱۰۸ × ۱.۵ باکتری است. نحوه تهیه این محیط در آزمایشگاه به شرح زیر است: برای تهیه کدورت 0.5 مک فارلند ما 0.5 میلی لیتر کلرید باریم 0.48 مولار را در 99.5 میلی لیتر اسید سولفوریک 0.36 نرمال مخلوط کردیم. که این محیط به مدت به مدت 6 ماه اگر در تاریکی و در ظرف در بسته قابل نگهداری است. اگر در هر زمان رسوبی در لوله مشاهده شود محیط غیر قابل استفاده خواهد بود.

    ۱۳۹۹ پنج شنبه ۳۰ بهمن | 12:52 | phasco

نظرات :