,هورمونی,الایزا,کیت,آزمایشگاه,فاسکو
 
 
0 نظرات  کومبس مستقیم و کومبس غیر مستقیم (Test Coombs)
  تاریخ : ۱۳۹۲ دوشنبه ۲۱ مرداد  [11:17]  

 

از این تست برای شناسایی انتی بادی های ناقص- که بر روی RBC نشسته و انها را حساس کرده است  استفاده می شود . این تست به دو روش مستقیم و غیر مستقیم انجام می شود . اساس این تست بر ایجاد شبکه بین آنتی بادی های ناقص در سطح گلبول های قرمز حساس شده (توسط AHG) برای ایجاد آگلوتیناسیون می باشد .این تست در دو مرحله کلی انجام می شود :

    • مرحله حساس شدن
    • اضافه کردن معرف کومبز

کومبز غیر مستقیم

 

 

  • کومبز مستقیم

از کومبز مستقیم برای شناسایی آنتی بادی های ناقص متصل به RBC جنین استفاده می شود . تفاوتی که بین کومبز مستقیم و غیر مستقیم وجود دارد این است که ،  مرحله حساس شدن گلبول های قرمز در بدن جنین اتفاق می افتد . عامل اصلی حساس شدن RBC (در 75 % موارد) ناسازگاری گروه های خونی RH میباشد هر چند که گروه های خونی ABO در 25 درصد موارد هم می توانند باعث حساس شدن RBC شوند .

ناسازگاری RH

اگر خون جنینRh+   و خون مادر Rh- باشد آنتی بادی های تولید شده از کلاس Igg در بدن مادر از جفت عبور کرده و باعث حساس شدن RBC های جنین می شود .

ناسازگاری ABO

این ناسازگاری زمانی باعث حساس شدن RBC می شود که گروه خونی مادرO و گروه خونی جنین , AB باشد در این صورت انتی بادی Igg3 انتی AB موجود در سرم مادر به جنین منتقل شده و باعث حساس شدن RBC جنین میشود .

 

روش انجام تست کومبز مستقیم

خون بند ناف را گرفته و از ان سوسپانسیون 5 درصد گلبول های قرمز تهیه می کنیم . چون مرحله حساس شدن RBC در بدن جنین اتفاق افتاده است بنابراین نیازی به انکوبه کردن نیست .

0.1 میلی لیتر از سوسپانسیون 5 درصد RBC را به 0.1 میلی لیتر AHG اضافه می کنیم و برای تشکیل شبکه بین RBC ، لوله های تست را به مدت 3 تا 5 دقیقه در دمای آزمایشگاه نگه می داریم . بعد از 5 دقیقه ، لوله ها را درRpm 1000و  به مدت یک  دقیقه سانتریفیوژ می کنیم . در اخر هم لوله ها را از نظر آگلوتیناسیون با زدن ضربه ای ضعیف به لوله ، برسی می کنیم .

 برسی نتایج

اگر اگلوتیناسیون مشاهده شود ، نشان دهنده حساس بودن RBC جنین است و باید تعین تیتر شود (که در این تعین تیتر ،  AHG را رقیق می کنیم نه سرم را ) چون در زایمان دوم به بعد باعث HDN در نوزادان می شود .

  • کومبز غیر مستقیم

از کومبز غیر مستقیم برای شناسای RBC حساس شده در محیط IN VITRO استفاده می شود . مرحله حساس شدن RBC ها در این روش توسط انکوباسیون انجام می شود . مراحل بعدی تقریبا مشابه کومبز مستقیم است . در این تست انتی بادی های ناقص ، در خون مریض (مادر) وجود دارد . این انتی بادی ها به دو علت عمده ممکن است تولید شوند :

  1. انتقال خون
  2. زایمان اول

برای بررسی وجود و یا عدم وجود این انتی بادی ، از سوسپانسیون 5 درصد RBC ، گروه خونی O+ استفاده می شود . چون آنتی بادیهای  ناقص ، شاخص های آنتی ژن RBC های گروه خونی O+  را حساس و با اضافه کردن AHG باعث ایجاد آگلوتیناسیون می شود .

علت استفاده از O+

برای اینکه ناسازگاری گروه های خونی ABO را از بین ببریم از این گروه خونی استفاده می کنیم چون اگر  گروه های خونی A,B,AB استفاد شود ، در این صورت ممکن است آنتی بادی ضدAB گروه خونی Oباعث حساس شدن سوسپانسیون شود .

و علت اینکه از RH+ استفاده می کنیم این است که می خواهیم آنتی بادی های ناقص بر روی آنتی ژن های RH+ بشیند و بتوانیم آگلوتیناسیون را مشاهده کنیم . اگر RH- باشد در روی RBC ، آنتی ژنی وجود نخواهد داشت تا RBC توسط آنتی بادی حساس شود .

 

روش انجام تست کومبز غیر مستقیم

0.1 میلیمتر از سرم بیمار را با 0.1 میلیمتر از سوسپانسیون 5 درصد مخلوط می کنیم و سپس لوله آزمایش را به مدت 30 تا 40 دقیقه در انکوباتور37 درجه قرار می دهیم در این مرحله RBC در صورت وجود انتی بادی ناقص در سرم ، حساس خواهند شد . بعد از این مدت ، لوله آزمایش را به مدت یک دقیقه در دور 1000 سانتریفیوژ می کنیم . و سه بار توسط سرم فیزیولوژی شستشو می دهیم تا آنتی بادی های غیر اختصاصی حذف شوند و فقط آنتی  بادی های اختصاصی که به شاخص های انتی ژنی RBCچسبیده اند ، باقی بمانند . بعداز این مراحل یک قطره AHG به لوله اضافه می کنیم و بعد از 3 تا 5 دقیقه لوله را به مدت یک دقیقه در دور 1000 سانتریفیوژ می کنیم و در آخر هم با زدن ضربه ای ضعیف اگلوتیناسیون را برسی می کینم.

 

برسی نتایج

اگر اگلوتیناسیون مشاهده شود تست کومبز غیر مستقیم بیمار را مثبت گزارش می کنیم .

چند نکته :

  • قبل از انکوبه با اضافه کردن دو قطره آلبومین می تواند اگلوتیناسیون را بهتر برسی کرد .
  • اگر بعد از انکوبه ، آگلوتیناسیون مشاهد شود نشان دهنده این نکته است که در سرم ما آنتی بادی کامل وجود دارد و در واقع Back Type را انجام داده ایم .
  • برای بررسی آگلوتیناسیون بهتر است از میکروسکوپ استفاده کنیم .

 در اخر هم روش تهیه سوسپانسیون پنج درصد را توضیح می دهیم هر چند که این روش برای همه آزمایشگاهی ها چیز بسیار پیش پا افتاده است اما برای برخی دانشجویان تازه کار دغدعه ای بس بزرگ است !!

  • روش تهیه سوسپاسیون 5 درصد

2 قطره خون داخل لوله آزمايش مي ريزيم. 3 میلی لیتر  سرم فیزيولوژي به لوله اضافه مي كنيم و در سانتريفيوژ در دور 3000 به مدت 5 دقيقه قرار مي دهيم سپس مايع رويي را خالي كرده و اين كار را تا 3 بار تكرار مي كنيم.




1 0 1




نظرات :
نام کاربری :
نام رمز :
 

آدرس این وب لاگ
 
علی کیا
Ali Kia
آرشيو نوشته ها
پیوندها
کلیه حقوق معنوی و مادی این سایت برای شرکت تحقیقاتی تولیدی فارمد آوران سبز محفوظ است 2017®

اسکریپس, آنفولانزای خوکی, گندم, گیاه‌شناسی, مشاورهٔ وراثت‌شناسى (ژنتيک), واﮐﺴــﻦﻫــﺎي, بدخيمي, intestinal, اپیدمیولوژی, همولیزین, کرینکتروس, انتي بادي هاي ناقص, آنمی داسی شکل, پوست و زیبایی, کارسینوم, درماتوفیت, واكسن سياه زخم, سولفاسالسیلیک, هيپوكرومي, آلومینیومی, انجمن دکترای علوم آزمایشگاهی, باید ناشتا باشم, اسید سولفوریک, تکنیک, اثر تابش اشعه خورشيد به پوست , ماهیچه, متخصص پوست و مو, ترموسايكلرها, اصطلاحات آزمايشگاهي , گليكول, سلولهایی, شاخص های حساسیت و اختصاصیت, الیگونوکلئوتید, نوع آزمایش خونی, منوكلنال, ویروس, فیزیولوژیکی, هپاتوسلولار،هپاتیت،, پنوموکوک, میکروب, سکته مغزی , لکونوستوک, تخریب سلول های سینوویال در غضروف ها, ائوزینوفیلی, قندهای معدی, مرفین, هیپوتالاموس, گوارشی, واکسی, Cayman, انسداد ریه, C-Peptide, کاردیولیپین, گرانولها, ویروس, ویتامینی, مُسکن دردهای سرطانی, مورفولوژی, الکتروفورز پروتئین ها, میکروب, ﻫﺮﭘﺲ, لکوسیت, ميكروب شناسي, وگالاکتوره, ديابت, رشته علوم آزمایشگاهی, مونونوکلئوز, گلیسیرد, محدوده نرمال tsh, کروماتوفیلی,